PCR技術(shù)的定量原理：
擴(kuò)增曲線
在Real- qPCR中，對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào)，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線，即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺(tái)期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化，此時(shí)即為基線期。
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系，所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
熒光染料的優(yōu)點(diǎn)：
產(chǎn)品僅用于科研使用簡便；
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合；
價(jià)格便宜；
熒光染料的缺點(diǎn)：
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會(huì)影響檢測(cè)的敏感性
非特異性產(chǎn)物會(huì)影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識(shí)別，進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決?？偟膩碚f，SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。

?
熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針，其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán)，3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。
正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí)，引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上，探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。
當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí)，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來，從而使其發(fā)出熒光。檢測(cè)到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比，因此，根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題，反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測(cè)，縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。
TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩(wěn)定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn)：
成本高；
設(shè)計(jì)難度大；
只能用于檢測(cè)產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
?
熒光定量PCR原理：
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR，后來也叫Real-Time PCR，是美國PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì)，熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個(gè)循環(huán)，收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào)，這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。
一般而言，熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段：熒光背景信號(hào)階段，熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系，根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段， PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系，我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便，在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
泛素交叉反應(yīng)蛋白(UCRP)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　枯草芽孢桿菌　1g

細(xì)胞球蛋白(CYGB)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　馬腸鏈球菌　25g

內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子(ESAM)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　木蹄層孔菌　5g

Epigen蛋白(EPG)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　≥99%　蘇云金芽孢桿菌　5MG

雙氫睪酮(DHT)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　95%　弗雷德里克斯堡假單胞菌　1g

甘露糖受體C2(MRC2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　95%　陰溝腸桿菌　250mg

防御素β103B(DEFβ103B)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　枯草芽孢桿菌　5g

血小板激活因子(PAF)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　>97.0%(GC)　漢塔成對(duì)桿菌　25g

肝型脂肪酸結(jié)合蛋白(FABP1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　>97.0%(GC)　紡錘狀鏈霉菌　5g

脫氫酶(XDH)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　96%　稻平臍蠕孢　100g

白介素1η(IL1η)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　96%　貝酵母　25g

卷曲同源物6(FZD6)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　96%　伯克霍爾德氏菌屬　5g

富酪蛋白(STATH)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　97%,ee值>98%　釀酒酵母　1g

整合素α1(ITGα1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　97%,ee值>98%　枯草芽孢桿菌　5g

細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子1(SOCS1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　厚孢根霉　1g

CD200受體1(CD200R1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　枯草芽孢桿菌　25g

二酰甘油-O-酰基轉(zhuǎn)移酶同源物1(DGAT1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　Hymenobacter　5g

Wolfram綜合征蛋白1(WFS1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　瑞士乳桿菌　250mg
巨睪前殖吸蟲探針法熒光PCR檢測(cè)試劑盒脫酸輔酶Ａ結(jié)構(gòu)域蛋白抗體Camk1g(Calcium/calmodulin dependent proin kinase IG)  鈣/鈣調(diào)蛋白依賴蛋白激酶IG抗原100µl

DCST1蛋白抗體TGF- Beta1 (Ttansforming Growth Factor – Beta1)  轉(zhuǎn)移生長因子–β1（抗原）1 ml

DCUN1D4蛋白抗體CaMK2b(calcium/calmodulin-dependent proin kinase II beita)  鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2b抗原400 ul

脫氧輔合酶蛋白抗體CAP1/Park7/DJ-1  Park7/DJ-1/CAP1抗原1 ml

短鏈脫氫酶/還原酶家族4樣2蛋白抗體CAP2(Adenylyl cyclase-associad proin 2)  環(huán)化酶相關(guān)蛋白CAP-2抗原100 ul

DDRGK1蛋白抗體TGF- Beta2 (Ttansforming Growth Factor – Beta2)  轉(zhuǎn)移生長因子–β2（抗原）1 Kit

DENND2A蛋白抗體TGF- Beta3 (Ttansforming Growth Factor – Beta3)  轉(zhuǎn)移生長因子–β3（抗原）100 ul

DENND1B蛋白抗體TGF- Beta R2 peptide  轉(zhuǎn)移生長因子β受體2（多肽抗原）100 ul

DEPTOR蛋白抗體Thymosin Alpha-1  胸腺肽 α-1 （胸腺肽-Thymosin alpha-1）100 ul