熒光定量PCR試劑盒技術(shù)：
產(chǎn)品僅用于科研本實(shí)用新型技術(shù)公開了一種實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設(shè)有限位凸起，下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋，側(cè)蓋遠(yuǎn)離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起，兩個(gè)卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿，固定桿上通過(guò)轉(zhuǎn)動(dòng)件轉(zhuǎn)動(dòng)連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實(shí)用新型技術(shù)通過(guò)將盒體分為上下組合的兩個(gè)部分，并將兩個(gè)部分通過(guò)側(cè)蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時(shí)使用試劑盒自帶的試管可提高檢測(cè)的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測(cè)基因名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。

樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測(cè)
1）紫外吸收法測(cè)定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測(cè)定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計(jì)算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。
實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μ
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
   視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
表沒(méi)食子兒茶素PDI (C81H6) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)3,二氫-2H-吡喃-2-甲

表兒茶素沒(méi)食子酸酯Drebrin (pan) AntibodyN-乙基嗎啉

萊苞迪甙AArgonau 1 (D84G10) XP® Rabbit mAb溴-甲

萊苞迪甙A（標(biāo)準(zhǔn)品）Argonau 1 (D84G10) XP® Rabbit mAb酮縮甘油

環(huán)亮氨酸甲酯鹽酸鹽Argonau 3 (D15D2) Rabbit mAb氟芐

水溶性四氮唑-3LRF/Pokemon (D7U2O) Rabbit mAb間甲

三溴新戊Phospho-Akt (Thr308) (C31E5E) Rabbit mAb (Biotinylad)2-基吡啶

水溶性四氮唑-1β-Actin (13E5) Rabbit mAb (Biotinylad)氟-甲

Tris HCl；三羥甲基氨烷鹽酸鹽NPC1L1 Antibody1-(2-甲氧基基)哌鹽

Tricine；三(羥甲基)甲基甘氨酸Granzyme B (D2H2F) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)2-溴-甲酸甲酯

三(羥甲基)甲基甘氨酸（標(biāo)準(zhǔn)品）α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjuga)三異丁基鋁

SAR245409 (XL765)RKIP (G38) Antibody亞碲酸鈉

3,3',5,5'-四甲基聯(lián)(TMB) HO-1 (P249) Antibody氯化鎘

S. Na;2-[(三(羥甲基)甲基)氨基]-1-乙磺酸鈉α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)5-甲基色鹽酸鹽

S；Tris乙磺酸,2-[（三（羥甲基）甲基）氨基]-1-乙磺酸S100A1 Antibody氯化亞汞

[ (N-三(羥甲基)甲氨基]-2-羥基磺酸鈉Sox2 (D6D9) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)亞硫酸

TAPSO；[ (N-三(羥甲基)甲氨基]-2-羥基磺酸HCFC1 Antibody (Carboxy-rminal Antigen)DL-高氨酸

N-三(羥甲基)甲基-氨基磺酸鈉ELP1/IKBKAP Antibody乙?；?/span>
貓免疫缺陷病毒探針?lè)晒釶CR檢測(cè)試劑盒水解酶結(jié)構(gòu)域蛋白15抗體Calpain 1/FITC  熒光素標(biāo)記鈣蛋白酶抗體IgG100 ul

肺α/β水解酶蛋白3抗體Calpain 2/FITC  熒光素標(biāo)記鈣蛋白酶2抗體IgG100 ul

三酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白F亞基3抗體Calponin 1/FITC  熒光素標(biāo)記鈣調(diào)節(jié)蛋白-1抗體IgG100 ul

三酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白A亞基5抗體Camk1g/FITC  熒光素標(biāo)記鈣/鈣調(diào)蛋白依賴蛋白激酶IG抗體 IgG100 ul

ADCK1蛋白抗體CaMK2a/FITC  熒光素標(biāo)記鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗體IgG100 ul

?；o酶A結(jié)合結(jié)構(gòu)域蛋白4抗體CaMK2b/FITC  熒光素標(biāo)記鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2b抗體IgG20 ul

α/β水解酶4抗體CANX/FITC  熒光素標(biāo)記抗鈣連蛋白抗體IgG100 ul

ADCK2蛋白抗體ISR- Alpha/RBITC  紅色熒光素羅丹明標(biāo)記(RBITC)胰島素受體-α抗體IgG(標(biāo)記抗體)300 ul

乙脫氫酶16家庭A1抗體CAP2/FITC  熒光素標(biāo)記環(huán)化酶相關(guān)蛋白CAP-2抗體IgG100 ul