熒光定量PCR試劑盒技術(shù)：
產(chǎn)品僅用于科研本實(shí)用新型技術(shù)公開了一種實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設(shè)有限位凸起，下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋，側(cè)蓋遠(yuǎn)離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起，兩個(gè)卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿，固定桿上通過轉(zhuǎn)動(dòng)件轉(zhuǎn)動(dòng)連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實(shí)用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個(gè)部分，并將兩個(gè)部分通過側(cè)蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時(shí)使用試劑盒自帶的試管可提高檢測(cè)的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測(cè)基因名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。 產(chǎn)品名稱 | 綿羊附紅細(xì)胞體探針法熒光PCR檢測(cè)試劑盒 | 英文名稱 | Eperythrozoon ovis | 貨號(hào) | YSP96680 |
樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測(cè)
1）紫外吸收法測(cè)定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測(cè)定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計(jì)算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
女貞苷（標(biāo)準(zhǔn)品）Phospho-DRP1 (Ser616) (D9A1) Rabbit mAb2-溴-5-硝甲 夏佛塔苷（標(biāo)準(zhǔn)品）CYLD Antibody2-溴-N,N-二 二氫小檗（標(biāo)準(zhǔn)品）NIPA Antibody2-溴已酸乙酯 桔紅素;桔皮素(標(biāo)準(zhǔn)品)ETO Antibody3，二甲氧基酸甲酯 桔紅素;桔皮素Histone H3 (D1H2) XP® Rabbit mAb3,5-二氟吡啶 硫酸小檗（標(biāo)準(zhǔn)品）Histone H3 (D1H2) XP® Rabbit mAb3,5-二溴-1H-1,2,三唑 噻二酮（標(biāo)準(zhǔn)品）Histone H3 (D1H2) XP® Rabbit mAb3,5-雙(三氟甲基)酸 噻二酮苷（標(biāo)準(zhǔn)品）Phospho-CYLD (Ser418) Antibody3,5-雙三氟甲酸 多被銀蓮花皂苷R8（標(biāo)準(zhǔn)品）Phospho-CYLD (Ser418) Antibody氨基-2-羥基乙酮 虎掌草皂甙D（標(biāo)準(zhǔn)品）T2 Antibody氨基-6-磺酰 粗莖甲（標(biāo)準(zhǔn)品）IRS-2 Antibody氨基-吡啶羧酸 Prosapogenin CP6IRS-2 Antibody基-1-金剛烷 CrovatinHS1 Antibody (Human Specific)基甲酸 CroverinIRAK1 (D51G7) Rabbit mAb甲 levatinTAK1 Antibody基溴化鎂 蒼耳亭（標(biāo)準(zhǔn)品）Phospho-HS1 (Tyr397) Antibody環(huán)己基酸 辛辣內(nèi)酯A（標(biāo)準(zhǔn)品）PRAME Antibody甲氧基-甲酸 麻楓樹酚酮B（標(biāo)準(zhǔn)品）Phospho-TAK1 (Thr184/187) (90C7) Rabbit mAb氯-1,2-并異噻唑
綿羊附紅細(xì)胞體探針法熒光PCR檢測(cè)試劑盒鯨*狀腺原氨酸(T3)ELISA試劑盒ABP/FITC 熒光素標(biāo)記雄激素結(jié)合蛋白抗體IgG100 ul 鯨皮質(zhì)(Cortisol)ELISA試劑盒Rat IgA/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗IgA抗體100 ul 鯨甲狀腺素(T4)ELISA試劑盒ABI1/SSH3BP1/FITC 熒光素標(biāo)記ABI1/SSH3BP1蛋白抗體IgG100 ul 鯨睪酮(T)ELISA試劑盒ACD/PTOP/FITC 熒光素標(biāo)記腎上腺皮質(zhì)發(fā)育異常蛋白抗體IgG20 ul 鯨雌二(E2)ELISA試劑盒ACE1/FITC 熒光素標(biāo)記血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抗體IgG100 ul 甲型流感ELISA試劑盒ACE2/FITC 熒光素標(biāo)記血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2抗體IgG20 ul 甲型流感H7N7 HA ELISA試劑盒ACEI/FITC 熒光素標(biāo)記血管緊張素1轉(zhuǎn)換酶抑制劑抗體IgG100 ul 甲型流感H5N1(Avian Flu)HA ELISA試劑盒Acetyl CoA Carboxylase/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗、大、、猴、牛乙酰輔酶A羧化酶抗體IgG20 ul 甲型流感H3N2 HA ELISA試劑盒Phospho-Acetyl CoA Carboxylase(Ser79) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗、大、、猴、牛酸化乙酰輔酶A羧化酶抗體IgG100 ul |
點(diǎn)擊放大會(huì)員_a.png)