客戶只需提供樣品和待檢測(cè)基因名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。

熒光定量PCR試劑盒技術(shù)：
產(chǎn)品僅用于科研本實(shí)用新型技術(shù)公開了一種實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設(shè)有限位凸起，下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋，側(cè)蓋遠(yuǎn)離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起，兩個(gè)卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿，固定桿上通過轉(zhuǎn)動(dòng)件轉(zhuǎn)動(dòng)連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實(shí)用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個(gè)部分，并將兩個(gè)部分通過側(cè)蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時(shí)使用試劑盒自帶的試管可提高檢測(cè)的效率。
樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀?；靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測(cè)
1）紫外吸收法測(cè)定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測(cè)定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計(jì)算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。
TCEP；三-(2-甲酰乙基)膦鹽酸鹽NLRC4 (D5Y8E) Rabbit mAb四氟酸鋰

N，N-二甲酰(分子生物學(xué)級(jí))IL-1β (D4T2D) Rabbit mAb (Mouse Specific)2-氟-硝

硫代硫酸鈉五水(AR)Phospho-Smad1 (Ser463/465)/ Smad5 (Ser463/465)/ Smad9 (Ser465/467) (D5B10) Rabbit mAb (PE Conjuga)2-氯-基-4,6-二甲基吡啶

化鈉(AR)Smad1 (D59D7) XP® Rabbit mAb (Biotinylad)2,5-二甲基-己炔-2,5-二

可溶性淀粉Phospho-Src (Ser17) (D7F2Q) Rabbit mAb2-溴-6-氟甲

硫脲Phospho-Bim (Ser77) (D4H12) Rabbit mAb1-N-Boc-吖丁啶羧酸

氯化鈷六水(分子生物學(xué)級(jí))Keratin 17/19 (D4G2) XP® Rabbit mAb1-Boc-基氮雜環(huán)丁烷

氯化鈷六水(AR)FIP200 (D10D11) Rabbit mAb2-溴-氟甲

酚,酚Phospho-DARPP-32 (Thr34) (D27A4) Rabbit mAb硫異煙

異戊CD82 (D7G6H) Rabbit mAb羥基乙

醋酸鋰，二水(AR)S5a/PSMD4 (D20B2) Rabbit mAb噻唑-2-甲酸

聚蔗糖400MTMR3 Antibody3,5-二氟芐酰溴

二硝基水楊酸PSMA3 (D4Y9O) Rabbit mAbS-Boc-氨甲基吡咯烷

二酸鈉CK1ε Antibody2-(叔丁氧羰基氨基)-哌啶

酸二氫鈉二水Puma (D30C10) Rabbit mAb1-Boc-磺酰氧基哌啶

二酸(AR)Puma (D30C10) Rabbit mAbN-Boc-羥基氮雜環(huán)丁烷

氯化錳四水LIS1 Antibody2-氟-5-(三氟甲基)酚

葡聚糖凝膠S-100 HRVDAC (D73D12) Rabbit mAb (HRP Conjuga)氯-乙基酚
文氏巴爾通體探針法熒光PCR檢測(cè)試劑盒豚鼠肝細(xì)胞生長因子(HGF)ELISA試劑盒ECM1  細(xì)胞外基質(zhì)蛋白1抗體100 ul

豚鼠甘油-3-酸脫氫酶(GAPDH)ELISA試劑盒ECP  嗜酸性粒細(xì)胞陽離子蛋白抗體100 ul

豚鼠干細(xì)胞因子/肥大細(xì)胞生長因子(SCF/MGF)ELISA試劑盒ED-1  外胚層發(fā)育不良抗體100 ul

豚鼠鈣調(diào)素(CAM)ELISA試劑盒EDNRA  內(nèi)皮素受體A抗體100 ul

豚鼠端粒酶()ELISA試劑盒EEF2  真核翻譯延長因子2抗體100 ul

豚鼠膽囊收縮素/腸促胰酶肽(CCK)ELISA試劑盒Phospho-EEF2 (Thr56)  酸化真核翻譯延長因子2抗體100 ul

豚鼠膽脂酶(CHE)ELISA試劑盒EEF2k  真核延伸因子激酶2抗體100 ul

豚鼠單核細(xì)胞趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA試劑盒Phospho-EEF2k (Ser366)  酸化真核延伸因子激酶2抗體100 ul

豚鼠單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISA試劑盒EGFR  表皮生長因子受體抗體100 ul
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μ
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
   視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。