熒光定量PCR試劑盒技術(shù)：
產(chǎn)品僅用于科研本實用新型技術(shù)公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設(shè)有限位凸起，下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋，側(cè)蓋遠(yuǎn)離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起，兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿，固定桿上通過轉(zhuǎn)動件轉(zhuǎn)動連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個部分，并將兩個部分通過側(cè)蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。 產(chǎn)品名稱 | 呂氏泰勒蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Theileria lowenshuni | 貨號 | YSP97270 |
樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀?；靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。
實驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
?COLLAGEN III蛋白表達(dá)西方雜交分析試劑盒 GPR17 ELISA Kit 100 ul COLLAGEN III蛋白免疫共沉淀分析試劑盒 GPR183(G-protein coupled receptor 183)ELISA Kit 1 Kit COLLAGEN III蛋白表達(dá)ELISA定量檢測試劑盒 GPR3 ELISA Kit 100 ul 細(xì)胞APC蛋白表達(dá)流式細(xì)胞儀檢測試劑盒 GPR22 ELISA Kit 100 ul 載玻片細(xì)胞APC蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒 GPR35(G-protein coupled receptor 35) ELISA Kit 100 ul 冰凍切片組織APC蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒 GPR58/TAAR2 ELISA Kit 100 ul 石蠟切片組織APC蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒 GPR50 ELISA Kit 1 Kit 載玻片細(xì)胞APC蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒 GPR105 ELISA Kit 100 ul 冰凍切片組織APC蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒 GPR81 ELISA Kit 100 ul 石蠟切片組織APC蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒 GPR107 ELISA Kit 100 ul 細(xì)胞APC蛋白表達(dá)比色法定量檢測試劑盒 GPR108 ELISA Kit 100 ul 細(xì)胞APC蛋白表達(dá)熒光定量檢測試劑盒 GPR116(G-protein coupled receptor 116) ELISA Kit 100 ul APC蛋白表達(dá)西方雜交分析試劑盒 GPR123 ELISA Kit 100 ul APC蛋白免疫共沉淀分析試劑盒 GP repeat Kit 100 ul APC蛋白表達(dá)ELISA定量檢測試劑盒 GPAA1 ELISA Kit 100 ul 細(xì)胞CDK2蛋白表達(dá)流式細(xì)胞儀檢測試劑盒 GPATCH2 ELISA Kit 100 ul
呂氏泰勒蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒環(huán)酸鳥苷門控通道蛋白CNG4抗體BCDF(Human B cell differetiation factor) ELISA Kit B細(xì)胞分化因子300 ul 甘氨酸受體α1+甘氨酸受體α2抗體Ep-CAM/CD362(Human Epithelial Cell Adhesion Molecule) ELISA Kit 上皮細(xì)胞粘附分子100 ul 甘氨酸受體α3/GlyR α3抗體Sam(Human soluble adhesion molecules) ELISA Kit 可溶性粘附分子20 ul G蛋白偶聯(lián)受體C5家族亞型D抗體AmAC-1(Human Alrnative macrophage activation-associad CC chemokine 1) ELISA Kit 巨噬細(xì)胞替代激活相關(guān)化學(xué)因子1100 ul G蛋白偶聯(lián)受體18抗體VEGFR-2/sFLK-1(Human soluble vascular endothelial growth factor receptor-2) ELISA Kit 可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體2300 ul G蛋白偶聯(lián)受體65抗體TSLP(Human thymic stromal lymphopoietin) ELISA Kit 胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素100 ul 生長終止特異性同源盒基因抗體PF/PFP(Human Perforin/Pore-forming proin) ELISA Kit 穿孔素/成孔蛋白100 ul 谷氨酸受體2抗體PTN(Human pleiotrophin) ELISA Kit 多效生長因子20 ul 谷氨酸受體3抗體sCD28(human soluble clusr of differentiation 28) ELISA Kit 可溶性CD28300 ul |
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