樣品RNA的抽提：
①產(chǎn)品僅用于科研取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。 產(chǎn)品名稱 | 禽腺病毒A型探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Fowl Adenovirus(FAdV-A) | 貨號 | YSP96725 |
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。好設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。 熒光定量PCR試劑盒技術：
本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設有限位凸起，下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋，側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設有環(huán)形凸起，兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內部設有固定桿，固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分，并將兩個部分通過側蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。
1-溴甲基萘F4/80 (BM8.1) Rat mAb (FITC Conjuga)1-氨基-3,5-二甲 2-(基)乙鹽酸鹽Mouse Macrophage Colony Stimulating Factor (mM-CSF)1,3,5-三氯 R-聯(lián)萘酚酸酯Mouse Macrophage Colony Stimulating Factor (mM-CSF)間三酚 2,6-二氯嘌呤Mouse Transforming Growth Factor β1 (mTGF-β1)硫酚 羥甲基氮雜環(huán)丁烷-1-羧酸叔丁酯Mouse Transforming Growth Factor β1 (mTGF-β1)2-甲基哌 5-(二氟甲氧基)-2--1H-并咪唑Nanog (D73G4) XP® Rabbit mAb (ChIP Formulad)嗎啉酮 二甲氨基吡啶Human Neurotrophin-3 (hNT-3)N-叔丁氧羰基-(R)-吡咯烷 2,二氯喹唑啉Human Neurotrophin-3 (hNT-3)氯-1-(N,N-二甲基) 2-氨基-噻唑乙酸乙酯Akt2 (L79B2) Mouse mAb異氧基乙 9-氯甲基蒽Phospho-ENSA (Ser67)/ARPP19 (Ser62) Antibody乙酸酯 2-氯噻吩-5-甲酸PDGF Receptor α (D13C6) XP® Rabbit mAb正丁基鋰 阿魏酸乙酯（標準品）PDGF Receptor α (D13C6) XP® Rabbit mAb基 1,8-桉葉素Phospho-YAP/TAZ Antibody Sampler Kit羥基 CAPS; (環(huán)已)磺酸Mouse Inrleukin-13 (mIL-13)丁硫 巴豆苷（標準品）Mouse Inrleukin-13 (mIL-13)1,二硫 巴西蘇木素（標準品）Phospho-PLK Binding Motif (ST*P) (D73F6) Rabbit mAb甲鎂 菝葜皂苷元（標準品）HGF β (D6S7D) XP® Rabbit mAb二叔丁基過氧化物 白當歸腦(標準品)HGF β (D6S7D) XP® Rabbit mAb2,5-己二酮
禽腺病毒A型探針法熒光PCR檢測試劑盒5-氨基乙酰酸合酶1抗體CCL28/FITC 熒光素標記粘膜相關上皮趨化因子MEC抗體IgG20 ul 防御素α1/3抗體CCP/FITC 熒光素標記兔抗瓜氨酸環(huán)肽抗體IgG100 ul ABC膜轉運蛋白抗體CCR-1/FITC 熒光素標記趨化因子受體1抗體IgG20 ul 植物延長蛋白（擬南芥）CCR-2/5/FITC 熒光素標記CC趨化因子受體2/5抗體IgG100 ul A-Raf抗體CCR-2A/FITC 熒光素標記細胞表面趨化因子受體2A抗體IgG20 ul 酸化A-Raf抗體CCR-2B/FITC 熒光素標記細胞表面趨化因子受體2B抗體IgG100 ul 紅細胞腺苷脫氨酶3抗體CCR-3/FITC 熒光素標記CC趨化因子受體3抗體IgG100µl 雄激素結合蛋白抗體CCR-4/FITC 熒光素標記CC趨化因子受體4抗體IgG400 ul 肝再生增強因子抗體CCR-5/FITC 熒光素標記細胞表面趨化因子受體5抗體IgG100 ul |
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