PCR技術的定量原理：
擴增曲線
在Real- qPCR中，對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號，隨著反應的進行，監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線，即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴增早期，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化，此時即為基線期。
PCR反應過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板，從而進入“平臺期”。在該時期，擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關系，所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。
熒光染料的優(yōu)點：
產(chǎn)品僅用于科研使用簡便；
可以與任何PCR產(chǎn)物結合；
價格便宜；
熒光染料的缺點：
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會影響檢測的敏感性
非特異性產(chǎn)物會影響結果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別，進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決?？偟膩碚f，SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。

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熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針，其基本原理是依據(jù)目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標記熒光基團，3'端標記淬滅基團。
正常情況下兩個基團的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時，引物與該探針同時結合到模板上，探針的結合位置位于上下游引物之間。
當擴增延伸到探針結合的位置時，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來，從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比，因此，根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術解決了熒光染料與非特異性擴增結合的問題，反應結束后無需通過熔解曲線檢測，縮短了實驗時間。
TaqMan探針技術的優(yōu)點：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩(wěn)定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術的缺點：
成本高；
設計難度大；
只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
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熒光定量PCR原理：
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR，后來也叫Real-Time PCR，是美國PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應的進行，PCR反應產(chǎn)物不斷累計，熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán)，收集一個熒光強度信號，這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴增曲線圖。
一般而言，熒光擴增曲線可以分成三個階段：熒光背景信號階段，熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期，擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關系，根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段， PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關系，我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便，在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
5 5'-二甲基-2,2'-聯(lián)吡啶(>98.0%(GC)(T))碳酸鈉

2,2'-聯(lián)嘧啶(>95.0%(GC))2-唑烷酮

4'-溴-2,2':6',2''-三聯(lián)吡啶(>96.0%(HPLC)(T))2--氟肼鹽酸鹽

2,2'-二吡啶-5,5'-二羧酸(>98.0%(GC)(T))2-氮雜雙環(huán)[2.2.1]庚-5--酮

2,2'-二辛可寧酸(>98.0%(HPLC))2--5-羥基嘧啶

2,6-雙(2-并咪唑基)吡啶(>98.0%(HPLC))2,二-5 硝基嘧啶

4,4'-雙(甲基)-2,2'-聯(lián)吡啶(>95.0%(GC)(T))哌啶甲酸

1,2-雙(4'-甲基-2,2'-聯(lián)吡啶-基)烷(>98.0%(GC))3,5-二甲酸

6,6'-二氨基-2,2'-聯(lián)吡啶(>98.0%(GC)(T))吡啶-2,6-二甲酸

4,4'-二甲氧基-2,2'-聯(lián)吡啶(>98.0%(GC)(T))DL-組氨酸

 6,6'-二溴-2,2'-聯(lián)吡啶(>95.0%(GC))甲

5,5'-二溴-2,2'-聯(lián)吡啶(>96.0%(HPLC)(T))鹽酸胍

2,2':6',2''-三聯(lián)吡啶(>98.0%(GC)(T))吡啶甲

1,2-二甲基-基化咪唑鎓(>98.0%(HPLC)(T))溴鹽

1-丁基-甲基化咪唑鎓(>95.0%(HPLC)(N))哌啶甲酸酯

基*基化銨(>98.0%(T))6-羥基煙酸

基三基化銨(>99.0%(T))曲酸

基三基化鏻(>98.0%(HPLC)(T))維生素D2
轉輪蟹通用探針法熒光PCR檢測試劑盒過氧化氫酶抗體Jab1/FITC  熒光素標記Jun激活區(qū)域-連接蛋白1抗體IgG250 ul

細胞色素P450 2C19抗體JAK1/FITC  熒光素標記蛋白質(zhì)酪氨酸激酶JAK-1抗體IgG250 ul

心肌特異性肌鈣蛋白T抗體Phospho-Jak1 (Tyr1022/1023) /FITC  熒光素標記酸化蛋白質(zhì)酪氨酸激酶JAK-1抗體IgG250 ul

CD161抗體JAK2/FITC  熒光素標記蛋白質(zhì)酪氨酸激酶JAK-2抗體IgG100 ul

7號染色體開放閱讀框65抗體phospho-JAK2(Tyr221) /FITC   熒光素標記酸化蛋白酪氨酸激酶JAK-2抗體IgG100 ul

甲基轉移酶cyt-19抗體phospho JAK2(Tyr1007+Tyr1008)/FITC  熒光素標記酸化蛋白酪氨酸激酶JAK-2抗體IgG100 ul

單核細胞趨化蛋白4抗體Jak3/FITC  熒光素標記蛋白酪氨酸激酶JAK-3抗體IgG100 ul

CD34抗體Phospho-Jak3 (Tyr785)/FITC   熒光素標記酸化蛋白酪氨酸激酶JAK-3抗體IgG100 ul

白細胞共同抗原抗體Phospho-Jak3 (Tyr980/981)/FITC   熒光素標記酸化蛋白酪氨酸激酶JAK-3抗體IgG100 ul