樣品RNA的抽提：
①產(chǎn)品僅用于科研取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測(cè)
1）紫外吸收法測(cè)定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測(cè)定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計(jì)算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。 產(chǎn)品名稱 | 圣保羅沙門氏菌探針法熒光PCR檢測(cè)試劑盒 | 英文名稱 | Salmonella saintpaul | 貨號(hào) | YSP97169 |
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。 熒光定量PCR試劑盒技術(shù)：
本實(shí)用新型技術(shù)公開了一種實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設(shè)有限位凸起，下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋，側(cè)蓋遠(yuǎn)離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起，兩個(gè)卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿，固定桿上通過轉(zhuǎn)動(dòng)件轉(zhuǎn)動(dòng)連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實(shí)用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個(gè)部分，并將兩個(gè)部分通過側(cè)蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時(shí)使用試劑盒自帶的試管可提高檢測(cè)的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測(cè)基因名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。
喹啉酸酸核糖基轉(zhuǎn)移酶(QPRT)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ≥95%(GC) 朱紅叢赤殼 500g 肝臟酸果糖激酶(PFKL)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 99% *蟲擬蠟菌 100mg ADP核糖轉(zhuǎn)移酶3(ART3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 99% 棒彎孢 20mg 金屬硫蛋白4(MT4)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 99% 白腐菌 100g 肌球蛋白ⅤA(MYO5A)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 99% 炭疽刺盤孢菌 25g 肌球蛋白ⅠB(MYO1B)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 仁果叢梗孢 1g 肌球蛋白ⅠC(MYO1C)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 枯草芽孢桿菌 25g 肌球蛋白ⅠD(MYO1D)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 冷海希瓦氏菌 5g 肌球蛋白ⅠE(MYO1E)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 費(fèi)氏中華根瘤菌 1g 肌球蛋白ⅠF(MYO1F)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 99% 肉座菌屬 1g 肌球蛋白ⅠG(MYO1G)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 99% 大黃歐文氏菌 25g 肌球蛋白ⅢA(MYO3A)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 99% 沙漠畢赤酵母 5g 肌球蛋白ⅢB(MYO3B)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 99% 粗柄白蘑 100g 肌球蛋白ⅦB(MYO7B)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 99% 扣囊復(fù)膜孢酵母 25g 肌球蛋白Ⅵ(MYO6)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 巴氏醋桿菌 100g 肌球蛋白ⅦA(MYO7A)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 微球菌 25g 肌球蛋白ⅨA(MYO9A)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 美澳型核果褐腐病菌 5g 肌球蛋白Ⅹ(MYO10)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 極考克氏菌 100ml
圣保羅沙門氏菌探針法熒光PCR檢測(cè)試劑盒E受體蛋白4抗體Parvalbumin 微白蛋白/細(xì)小清蛋白抗原1 Kit 風(fēng)疹病毒糖蛋白抗體Peptide YY 酪酪肽多肽（1-36）1 Kit EFR3A蛋白抗體Rad51 Rad51抗原1 Kit ENAH蛋白抗體RAP1A (RAS-relad proin-1a precursor) Rap1A抗原500 ul 基二酸腦病蛋白抗體RAR- Beta(Retinoic acid -R- Beta) 維甲酸受體-β抗原100 ml 轉(zhuǎn)錄因子E2F-3抗體RASSF1A(Ras association domain family 1A) Ras相關(guān)區(qū)域家族1A抗原25 ml 轉(zhuǎn)錄因子E2F-5抗體Resistin 抵抗素抗原100µl DNA切除修復(fù)蛋白1抗體RGS2 peptide G蛋白信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)因子2抗原1 ml 轉(zhuǎn)錄因子E2F6抗體RhoA (RhoA proin) RhoA抗原15 ml |
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