客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。

熒光定量PCR試劑盒技術(shù)：
產(chǎn)品僅用于科研本實用新型技術(shù)公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設有限位凸起，下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋，側(cè)蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設有環(huán)形凸起，兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設有固定桿，固定桿上通過轉(zhuǎn)動件轉(zhuǎn)動連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側(cè)均設置有收納槽。本實用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個部分，并將兩個部分通過側(cè)蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。
P21蛋白表達西方雜交分析試劑盒　LCORL ELISA Kit　100 ul

P16基因表達北方雜交分析試劑盒　LEF1 ELISA Kit　100 ul

P21基因表達北方雜交分析試劑盒　LDHAL6A ELISA Kit　1 Kit

端粒酶活性TRAP電泳分析試劑盒　LCTL ELISA Kit　100 ul

端粒酶活性TRAP實時定量檢測試劑盒　LDB1 ELISA Kit　100 ul

人體hTERT表達實時定量檢測試劑盒　LDLRAD1 ELISA Kit　100 ug

人體hTERT基因甲基化檢測試劑盒　LDB3 ELISA Kit　100 ul

雙參數(shù)細胞周期G0期流式細胞分析試劑盒　LEF1 ELISA Kit　100 ul

雙參數(shù)細胞周期G1期流式細胞分析試劑盒　LDOC1 ELISA Kit　100 ul

雙參數(shù)細胞周期S期流式細胞分析試劑盒　LEFTY2 ELISA Kit　100 ul

雙參數(shù)細胞周期G2期流式細胞分析試劑盒　LCTL ELISA Kit　500 ul

雙參數(shù)細胞周期M期流式細胞分析試劑盒　LDB1 ELISA Kit　100 ul

多參數(shù)細胞周期全周期流式細胞分析試劑盒　LDHAL6A ELISA Kit　100 ug

動物細胞周期G0期同步（SYNCHRONY）處理試劑盒　LATS2 ELISA Kit　100 ul

動物細胞周期G1早期同步（SYNCHRONY）處理試劑盒　LDB3 ELISA Kit　100 ul

動物細胞周期G1期同步（SYNCHRONY）處理試劑盒　LAYN ELISA Kit　100 ul
唾液鏈球菌探針法熒光PCR檢測試劑盒F-box蛋白家族FBXO25抗體leptin  瘦素100 ul

F-box蛋白家族FBXO18抗體Lymphotactin  淋巴細胞趨化因子100 ul

FRG2B蛋白抗體MDC/CCL22  巨噬細胞來源的趨化因子100 ul

FAM71A蛋白抗體Beta2-Microglobulin  β2微球蛋白100 ul

FAM83F蛋白抗體Adrenomedullin Human  腎上腺髓質(zhì)素400 ul

FBXL17蛋白抗體STBM human  合體滋養(yǎng)細胞微絨毛膜100 ul

FCHSD1蛋白抗體MMP-1  血清金屬基質(zhì)蛋白酶-1500 ul

FBXL5蛋白抗體MMP-3  血清金屬基質(zhì)蛋白酶-3100 ul

FBXL12蛋白抗體MMP-7  血清金屬基質(zhì)蛋白酶-7100 ul
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μ
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
   視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。好設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。