熒光染料的優(yōu)點(diǎn)：
產(chǎn)品僅用于科研使用簡(jiǎn)便；
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合；
價(jià)格便宜；
熒光染料的缺點(diǎn)：
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會(huì)影響檢測(cè)的敏感性
非特異性產(chǎn)物會(huì)影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問(wèn)題可以通過(guò)熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識(shí)別，進(jìn)而通過(guò)PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來(lái)說(shuō)，SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

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熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為T(mén)aqMan探針，其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán)，3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。
正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí)，引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上，探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。
當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí)，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來(lái)，從而使其發(fā)出熒光。檢測(cè)到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比，因此，根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問(wèn)題，反應(yīng)結(jié)束后無(wú)需通過(guò)熔解曲線檢測(cè)，縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。
TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩(wěn)定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn)：
成本高；
設(shè)計(jì)難度大；
只能用于檢測(cè)產(chǎn)物長(zhǎng)度低于150bp的反應(yīng)。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類(lèi)基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
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熒光定量PCR原理：
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱(chēng)TaqMan PCR，后來(lái)也叫Real-Time PCR，是美國(guó)PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來(lái)的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來(lái)實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì)，熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過(guò)一個(gè)循環(huán)，收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào)，這樣我們就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。
一般而言，熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段：熒光背景信號(hào)階段，熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒(méi)有線性關(guān)系，根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段， PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系，我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便，在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
胃泌素釋放肽，豬2,6-二-氟甲酸

胃泌素釋放肽-Lys（生物素），人N-Boc-氨基環(huán)己酮

胃饑餓素，人異酸異酯

生長(zhǎng)激素釋放因子，大鼠2-氟-5-溴

生長(zhǎng)激素釋放因子（1-44），人溴-5-氟

生長(zhǎng)激素釋放因子-2羧基酸頻那酯

胰高血糖素樣肽-2（1-34)，人叔丁基二甲基硅烷

胰高血糖素（1-29），牛，人，豬氨基吡唑

胰高血糖素（19-29），牛，人，豬2-氨基6-甲基吡啶

胰高血糖素樣肽Ⅰ（7-36）酰，人基溴化鎂

促性腺激素釋放激素相關(guān)蛋白（1-13），人1,酮二羧酸二甲酯

海沙瑞林溴-2,6-二氟甲酸

組素55-溴-7-氮雜吲哚

高鈣血癥惡性因子（1-34）酰，人5-溴-2-嘧啶

高鈣血癥惡性因子（1-34）， 人2,二氟酮

胰島素樣生長(zhǎng)因子I（57-70）2-甲基-6-吡啶

胰島素樣生長(zhǎng)因子Ⅱ（69-84）N-BOC-2-哌酸 甲基 酯

白介素-1β轉(zhuǎn)化酶底物2--6-氨基嘌呤
松鼠猴皰疹病毒探針?lè)晒釶CR檢測(cè)試劑盒中性膽固酯水解酶1抗體GADD34/FITC  熒光素標(biāo)記生長(zhǎng)抑制DNA損傷基因34抗體IgG100 ul

星形膠質(zhì)細(xì)胞抗體GADD45/FITC  熒光素標(biāo)記生長(zhǎng)抑制DNA損傷基因45抗體IgG100 ul

縮酶A抗體GADD153/FITC  熒光素標(biāo)記生長(zhǎng)抑制DNA損傷基因153抗體IgG100 ul

膜粘連蛋白6抗體Galanin/FITC  熒光素標(biāo)記神經(jīng)節(jié)肽抗體“甘丙肽”IgG100 ul

β淀粉樣肽（25-35）抗體Galectin /FITC  熒光素標(biāo)記半糖凝集素抗體IgG100 ul

血管緊張素I抗體GAI3/FITC  熒光素標(biāo)記抑制型G蛋白α3抗體IgG100 ul

腎上腺髓質(zhì)素抗體(N端20肽)Galectin-3/FITC  熒光素標(biāo)記半糖凝集素-3抗體IgG100 ul

ADP核糖基化因子結(jié)合蛋白2抗體GAP-43 /FITC  熒光素標(biāo)記神經(jīng)生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43（抗體）IgG100 ul

精氨酸加壓素受體2抗體GAPDH /FITC  熒光素標(biāo)記3-酸甘油脫氫酶抗體IgG100 ul
PCR技術(shù)的定量原理：
擴(kuò)增曲線
在Real- qPCR中，對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過(guò)程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào)，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線，即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化，此時(shí)即為基線期。
PCR反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無(wú)線性關(guān)系，所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。