樣品RNA的抽提：
①產品僅用于科研取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為：A260 ×稀釋倍數× 40 g/ml。 產品名稱 | 質型多角體病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Cytoplasmic Polyhedrosis Virus(CPV) | 貨號 | YSP96612 |
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。好設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．產品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。 熒光定量PCR試劑盒技術：
本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設有限位凸起，下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋，側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設有環(huán)形凸起，兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內部設有固定桿，固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分，并將兩個部分通過側蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數據分析，提供實驗報告給您。
枸櫞酸奧芬那君;枸酸芬那君4E-BP1 (53H11) Rabbit mAb (PE Conjuga)輪環(huán)藤寧 β-半糖苷酶Notch1 (5B5) Rat mAb12-冠-4 脫落酸(標準品)TDP43 (G400) Antibody甲基硫代磺酸甲酯 脫落酸(高純)p70 S6 Kinase MCF7 Control Cell Extracts1,2,3,四氫-2-萘 脫落酸,S-誘抗素; 壯芽靈TDP43 (A260) Antibody3,5-二羥基甲 胃蛋白酶(1:3000)PSD95 (D27E11) XP® Rabbit mAb三銀 核糖核酸酶A(sigma)PSD95 (D27E11) XP® Rabbit mAb溴吡啶甲酸甲酯 S-4MLANA/MART-1 Antibody5-溴煙酸甲酯 胃蛋白酶(1:12000)Phospho-μ-Opioid Receptor (Ser375) Antibody伯吉斯試劑 蛋白酶K(進分)Rabbit IgG Isotype Control (Alexa Fluor® 647 Conjuga)哌啶甲酸甲酯 蛋白酶K(Sigma)Phospho-Doublecortin (Ser334) Antibody3,5-二溴-羥基甲 胰凝蛋白酶抑制劑CMTM6 Antibody2-溴-5-羥基甲 亮抑蛋白酶肽(進口)Phospho-DRP1 (Ser616) Antibody異煙酸甲酯 胃酶抑素A;抑肽素;胃蛋白酶抑制劑MeCP2 (D4F3) XP® Rabbit mAb二硫代酸二乙酯 巖藻糖；L-巖藻糖MeCP2 (D4F3) XP® Rabbit mAb1-氨基酮鹽酸鹽 果膠酶JMJD3 Antibody7-溴庚酸乙酯 β-淀粉酶(70萬u/ml液體)HDAC1 (D5C6U) XP® Rabbit mAb7-氨基庚酸乙酯鹽酸鹽 β-淀粉酶(酶活5萬粉末)HDAC1 (D5C6U) XP® Rabbit mAb(1S,2S)-1,2-二基乙二
質型多角體病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒環(huán)加氧酶1(COX-1)ELISA試劑盒RNF126 環(huán)指蛋白126抗體500 ul 花生四酸5脂氧合酶(Alox5)ELISA試劑盒RNF148 環(huán)指蛋白148抗體100 ul 花生四酸12-脂氧合酶,白細胞型(Alox12l/Alox12/Alox15)ELISA試劑盒ROCK1 Rho相關蛋白激酶1抗體20 ul 花生四酸(AA)ELISA試劑盒ROCK2 Rho相關蛋白激酶2抗體100 ul 紅細胞生成素受體(EPOR)ELISA試劑盒RPLP0 酸性核糖體蛋白大亞基P0抗體100 ul 紅細胞生成素(EPO)ELISA試劑盒ROS/c ros 活性氧簇ROS抗體100 ul 橫紋肌輔肌動蛋白α (sm Actinin-α )ELISA試劑盒RPS6 S6核糖體蛋白抗體100 ul 黑色素細胞抗體(MC Ab)ELISA試劑盒Phospho-S6 Ribosomal Proin (Ser235/236) 酸化S6核糖體蛋白抗體100 ul 核因子-κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)ELISA試劑盒Phospho-S6 Ribosomal Proin (Ser240/244) 酸化S6核糖體蛋白抗體20 ul |
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