PCR技術(shù)的定量原理：
擴(kuò)增曲線
在Real- qPCR中，對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào)，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線，即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化，此時(shí)即為基線期。
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系，所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
熒光染料的優(yōu)點(diǎn)：
產(chǎn)品僅用于科研使用簡(jiǎn)便；
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合；
價(jià)格便宜；
熒光染料的缺點(diǎn)：
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會(huì)影響檢測(cè)的敏感性
非特異性產(chǎn)物會(huì)影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識(shí)別，進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決?？偟膩碚f，SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。

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熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針，其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán)，3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。
正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí)，引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上，探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。
當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí)，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來，從而使其發(fā)出熒光。檢測(cè)到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比，因此，根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題，反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測(cè)，縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。
TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩(wěn)定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn)：
成本高；
設(shè)計(jì)難度大；
只能用于檢測(cè)產(chǎn)物長(zhǎng)度低于150bp的反應(yīng)。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
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熒光定量PCR原理：
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR，后來也叫Real-Time PCR，是美國PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì)，熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個(gè)循環(huán)，收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào)，這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。
一般而言，熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段：熒光背景信號(hào)階段，熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系，根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段， PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系，我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便，在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
乙酸甲酯(色譜級(jí))Nav1.5 (D9J7S) Rabbit mAb羧基噠

乙二甲乙酸酯(色譜級(jí))Zap-70 (D1C10E) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)乙基噻吩

異戊烷(色譜級(jí))c-Myc (D84C12) Rabbit mAb (Pacific Blue™ Conjuga)氨基-5-甲基吡啶

甲(色譜級(jí))Ras (G12D Mutant Specific) (D8H7) Rabbit mAb正丁基

對(duì)甲酰氯(色譜級(jí))SF3B1 (D7L5T) Rabbit mAb2-脫氧-2,2-二氟戊呋喃糖-1-酮 3,5-二安息香酸鹽

硝烷(色譜級(jí))CART (D6M2M) Rabbit mAb四(3,5-二叔丁基-羥基)酸季戊四酯

正辛烷(色譜級(jí))LEF1 (C12A5) Rabbit mAb (PE Conjuga)1-環(huán)基哌

2-戊酮(色譜級(jí))p38 MAPK (D13E1) XP® Rabbit mAb (HRP Conjuga)6-氯甲基-2-基吡啶

戊酮(色譜級(jí))EpCAM (D9S3P) Rabbit mAb (IHC Preferred)2,二氟三氟甲

正(色譜級(jí))TCF1/TCF7 (C63D9) Rabbit mAb (PE Conjuga)5-氟-2-甲

正戊烷(色譜級(jí))ELMO1 (D4K2E) Rabbit mAb5-氯-2-甲酸

石油(色譜級(jí))Phospho-PLCγ1 (Tyr783) (D6M9S) Rabbit mAb (PE Conjuga)2-溴-6-甲氧基甲酸

石油(色譜級(jí))MPC1 (D2L9I) Rabbit mAbD-亮氨

石油(色譜級(jí))BiP (C50B12) Rabbit mAb (PE Conjuga)2，二溴

三乙(色譜級(jí))RAP80 (D1T6Q) Rabbit mAb5-甲氧基-2-

叔丁(色譜級(jí))S6 Ribosomal Proin (5G10) Rabbit mAb (HRP Conjuga)硝地平

異辛烷(色譜級(jí))ELL (D7N6U) Rabbit mAb2-氯喹噁啉

異辛烷(色譜級(jí))E-Cadherin (4A2) Mouse mAb2-[(羥基氨基)亞氨基]-1-吡咯烷甲酸叔丁酯
牛仰口線蟲探針法熒光PCR檢測(cè)試劑盒第八因子相關(guān)抗原(FⅧAg)ELISA試劑盒HLA G  類白細(xì)胞抗原G抗體20 ul

第10號(hào)染色體缺失并與張力蛋白同源的酸酶(PN/MMAC1)ELISA試劑盒HLA E  類白細(xì)胞抗原E抗體100 ul

抵抗素樣分子β(RELM-β)ELISA試劑盒HMGA1  高遷移率族蛋白A1抗體100 ul

抵抗素(Resistin)ELISA試劑盒HMGA2  高遷移率族蛋白A2抗體100 ul

低氧誘導(dǎo)因子3α(HIF-3α)ELISA試劑盒HMGB1  高遷移率族蛋白B1抗體100 ul

低氧誘導(dǎo)因子2(HIF-2)ELISA試劑盒HMGB4  高遷移率族蛋白B4抗體100 ul

低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)ELISA試劑盒HNF1/LFB1/HNF1A  肝細(xì)胞核因子1α抗體100 ul

低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白5(LRP-5)ELISA試劑盒Heme Oxygenase 1/HO-1  血紅素氧合酶 1/熱休克蛋白32抗體100 ul

低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白4(LRP-4)抗體(IgG)ELISA試劑盒Heme Oxygenase 1/HO-1  血紅素氧合酶 1/熱休克蛋白32抗體100 ul