客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。 產(chǎn)品名稱 | 亞洲分枝桿菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Mycobacterium asiaticum | 貨號 | YSP96940 |
熒光定量PCR試劑盒技術(shù)：
產(chǎn)品僅用于科研本實用新型技術(shù)公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設(shè)有限位凸起，下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋，側(cè)蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起，兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿，固定桿上通過轉(zhuǎn)動件轉(zhuǎn)動連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個部分，并將兩個部分通過側(cè)蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。
Rhesus antibody Rh phospho-M-CSF Receptor(Tyr708) 酸化巨噬細胞集落刺激因子受體抗體 規(guī)格 0.1ml M2-PK ( pyruvate Kinase M2 ) 丙酮酸激酶-M2(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg 人血管緊張素原(aELISA試劑盒英文名稱：Human angiotensinogen，aELISA Kit進口/分裝 人血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)ELISA試劑盒英文名稱：Human Angiotensin converting enzyme，ACE ELISA Kit* 人血管緊張肽酶A(ATA)ELISA試劑盒 英文名稱：Human Angiotensinase A,ATA ELISA Kit* 人血管內(nèi)皮鈣粘著蛋白復(fù)合體(VE-cad)ELISA試劑盒英文名稱：Human Vascular Endothelial-Cadherin Complex,VE-cad ELISA Kit* 人血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)ELISA試劑盒 英文名稱：Human Vascular Endothelial cell Growth Factor，VEGF ELISA Kit 進口/原裝 BTNL2 英文名稱： 嗜乳脂蛋白樣2抗體 0.1ml Anti-RAR-Alpha 維甲酸受體-α 抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml AP(Human Aprotinin) ELISA Kit 人抑肽酶Multi-class antibodies規(guī)格： 48T Anti-CHRNA2(neuronal) 煙堿型酰膽堿受體A2(神經(jīng)型)抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml Rhesus antibody Rh IL-9 白介素9抗體 規(guī)格 0.1ml BF ELISA Kit 大鼠B因子 96T PMP22 英文名稱： 外周髓鞘蛋白-22抗體 0.1ml 3% NaC1V-P半固體發(fā)酵管20支3% NaC1V-P半固體發(fā)酵管BR Korser氏肉湯發(fā)酵管20支Korser氏肉湯發(fā)酵管BR 丙二酸鹽發(fā)酵管20支丙二酸鹽發(fā)酵管BR 西蒙氏枸櫞酸鹽發(fā)酵管20支西蒙氏枸櫞酸鹽發(fā)酵管BR 蛋白胨水(色氨酸肉湯)發(fā)酵管20支蛋白胨水(色氨酸肉湯)發(fā)酵管BR 無鹽胰胨水發(fā)酵管20支無鹽胰胨水發(fā)酵管BR
亞洲分枝桿菌探針法熒光PCR檢測試劑盒9號染色體開放閱讀框72抗體phospho C-Met/pHGFR(pTyr1365)/FITC 熒光素標(biāo)記抗酸化原癌基因c-Met抗體IgG100 ul 鈣粘附分子10抗體phospho-c-Jun/AP-1(pThr91/pThr93)/FITC 熒光素標(biāo)記抗酸化原癌基因c-Jun抗體IgG100 ul R Cadherin/CDH4phospho-c-Jun (Ser243) /FITC 熒光素標(biāo)記酸化原癌基因c-Jun抗體IgG100 ul 細小病毒H-1株(H-1)抗體phospho-c-Jun (Thr93) /FITC 熒光素標(biāo)記酸化原癌基因c-Jun抗體IgG20 ul 22號染色體開放閱讀框9抗體phospho-c-Jun (Ser63) /FITC 熒光素標(biāo)記酸化原癌基因c-Jun抗體IgG100 ul 腫瘤高表達細胞周期相關(guān)蛋白抗體phospho-MEK1/MAPKK1(pSer298)/FITC 熒光素標(biāo)記抗酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶1抗體IgG100 ul 9號染色體開放閱讀框117抗體phospho Histone H1,4(pSer27)/FITC 熒光素標(biāo)記抗酸化組蛋白H1,4樣蛋白抗體IgG100 ul 6號染色體開放閱讀框120抗體phospho c-kit/SCFR/CD117(pTyr936)FITC 熒光素標(biāo)記抗酸化原癌基因c-kit抗體IgG100 ul 補體C1qα鏈多肽抗體Phospho-c-Kit (Tyr703) /FITC 熒光素標(biāo)記酸化原癌基因c-kit抗體IgG100 ul
實驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。好設(shè)立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。 |
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