PCR技術(shù)的定量原理：
擴(kuò)增曲線
在Real- qPCR中，對整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測并記錄其熒光信號，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線，即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化，此時(shí)即為基線期。
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺期”。在該時(shí)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系，所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
熒光染料的優(yōu)點(diǎn)：
產(chǎn)品僅用于科研使用簡便；
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合；
價(jià)格便宜；
熒光染料的缺點(diǎn)：
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會(huì)影響檢測的敏感性
非特異性產(chǎn)物會(huì)影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識別，進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決?？偟膩碚f，SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。

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熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針，其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán)，3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。
正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí)，引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上，探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。
當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí)，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來，從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比，因此，根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題，反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測，縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。
TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩(wěn)定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn)：
成本高；
設(shè)計(jì)難度大；
只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
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熒光定量PCR原理：
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR，后來也叫Real-Time PCR，是美國PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì)，熒光信號強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個(gè)循環(huán)，收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號，這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。
一般而言，熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段：熒光背景信號階段，熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺期。在熒光背景信號階段，擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系，根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段， PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系，我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便，在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
甘草酸二銨鹽Phospho-S6 Ribosomal Proin (Ser240/244) (D68F8) XP® Rabbit mAb5-溴-2-羥基-硝基吡啶

橄欖苦苷（標(biāo)準(zhǔn)品）PSA/KLK3 (D6B1) XP®Rabbit mAb2-哌啶甲酸乙酯

高麗槐素(標(biāo)準(zhǔn)品)PSA/KLK3 (D6B1) XP®Rabbit mAb氯吡唑

高良姜素(標(biāo)準(zhǔn)品）Anti-rabbit IgG (H+L) (DyLight™ 680 Conjuga)氨基-甲酸

高三尖杉酯(標(biāo)準(zhǔn)品）Anti-rabbit IgG (H+L) (DyLight™ 680 Conjuga)2-金剛烷甲酸

高香草酸(標(biāo)準(zhǔn)品)STAM2 (D8B3G) Rabbit mAb氯乙

告達(dá)亭苷元Human Oncostatin M (hOSM)吡啶基偕肟

格列風(fēng)內(nèi)酯（標(biāo)準(zhǔn)品）Human Oncostatin M (hOSM)4,5-二氯咪唑

葛根素(標(biāo)準(zhǔn)品)LAP2α (3A3) Mouse mAb氨基-2-氟吡啶

葛根素Mouse Oncostatin M (mOSM)芐基溴

根皮苷（標(biāo)準(zhǔn)品）Mouse Oncostatin M (mOSM)2,6-二氯-硝基吡啶

根皮苷Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb (Biotinylad)1-(三氟基)哌鹽酸鹽

根皮素(標(biāo)準(zhǔn)品)c-Raf (D4B3J) Rabbit mAb氨基-氯酚

根皮素Phospho-YAP (Ser109) (E5I9G) Rabbit mAb2-氨基-甲基吡啶

鉤藤(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-Stat1 (Tyr701) (58D6) Rabbit mAb (Biotinylad)2-氨基-甲基噻唑

β-谷甾p44/42 MAPK (Erk1/2) (137F5) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)2,4,6-三氯吡啶

光甘草定JMJD1B (6A1-1F5) Mouse mAb2,3,5-三氯吡啶

鬼臼毒素（標(biāo)準(zhǔn)品）JMJD1B (6A1-1F5) Mouse mAb1-氨基芘
土拉熱弗朗西斯菌探針法熒光PCR檢測試劑盒ARM重復(fù)X連鎖蛋白ARMCX3抗體CA125/Biotin  生物素標(biāo)記兔抗CA125抗原抗體IgG100 ul

ARM重復(fù)X連鎖蛋白ARMCX1抗體CD48/SLAMF2/FITC  熒光素標(biāo)記CD48抗體IgG100 ul

ARM重復(fù)X連鎖蛋白ARMCX2抗體CD44/PE  熒光素PE標(biāo)記CD44抗體IgG100µl

自噬相關(guān)蛋白10抗體CD45/PE  熒光素PE標(biāo)記兔抗、CD45抗體IgG100 ul

?；o酶A結(jié)合結(jié)構(gòu)域蛋白6抗體CD133/Biotin  生物素化造血干細(xì)胞抗原CD133抗體100 ul

氨基?；?抗體CD55/DAF/FITC  熒光素標(biāo)記衰變加速因子CD55抗體IgG20 ul

脂肪甘油三酯脂酶抗體CD56/FITC  熒光素標(biāo)記CD56抗體IgG100 ul

酸化腺苷單酸活化蛋白激酶α1抗體CD56/NCAM1/FITC  熒光素標(biāo)記神經(jīng)細(xì)胞粘附分子1抗體IgG100 ul

雙調(diào)蛋白（結(jié)腸直腸細(xì)胞源性生長因子）抗體CD57/FITC  熒光素標(biāo)記抗CD57抗體IgG20 ul