PCR技術(shù)的定量原理：
擴(kuò)增曲線
在Real- qPCR中，對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào)，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線，即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化，此時(shí)即為基線期。
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無(wú)線性關(guān)系，所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
熒光染料的優(yōu)點(diǎn)：
產(chǎn)品僅用于科研使用簡(jiǎn)便；
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合；
價(jià)格便宜；
熒光染料的缺點(diǎn)：
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會(huì)影響檢測(cè)的敏感性
非特異性產(chǎn)物會(huì)影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識(shí)別，進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決?？偟膩?lái)說，SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。

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熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針，其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán)，3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。
正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí)，引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上，探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。
當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí)，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來(lái)，從而使其發(fā)出熒光。檢測(cè)到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比，因此，根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題，反應(yīng)結(jié)束后無(wú)需通過熔解曲線檢測(cè)，縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。
TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩(wěn)定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn)：
成本高；
設(shè)計(jì)難度大；
只能用于檢測(cè)產(chǎn)物長(zhǎng)度低于150bp的反應(yīng)。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
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熒光定量PCR原理：
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR，后來(lái)也叫Real-Time PCR，是美國(guó)PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來(lái)的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來(lái)實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì)，熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個(gè)循環(huán)，收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào)，這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。
一般而言，熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段：熒光背景信號(hào)階段，熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系，根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段， PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系，我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便，在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
VEGF共調(diào)節(jié)趨化因子1(VCC1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　≥98.0 %　暗孢毛殼　25g

VGF神經(jīng)生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)蛋白(VGF)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　≥98.0 %　白黑鏈霉菌　5g

細(xì)胞因子受體樣因子1(CRLF1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　灰樹花　25g

生長(zhǎng)分化因子5(GDF5)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　植物乳桿菌　5g

羧肽酶E(CPE)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　≥99%　沼澤紅假單胞菌　100MG

白介素23受體(IL23R)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　≥99%　枯草芽孢桿菌　500MG

TATA框結(jié)合蛋白關(guān)聯(lián)因子12(TAF12)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　97%　不動(dòng)桿菌　1g

精氨酸/絲氨酸豐富剪接因子4(SRSF4))檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　97%　Arthrobacter　5g

蛋白酸酶3調(diào)節(jié)因子亞基1(PPP3R1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　德氏乳桿菌保加利亞亞種　25g

N-甲基-D-天氡氨酸離子能谷氨酸受體2A(GRIN2A)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　黃桿菌　5g

組氨酸豐富糖蛋白(HRG)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　新城疫病毒　1g

p53上調(diào)凋亡調(diào)節(jié)因子(PUMA)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　枯草芽孢桿菌　5g

T-細(xì)胞可誘導(dǎo)共刺激分子(ICOS)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　97%　沙阿霉素鏈霉菌　25g

分泌型卷曲相關(guān)蛋白5(SFRP5)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　97%　棲沙鹽水孢菌　5g

重肽鐵蛋白(FTH)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　果生鏈核盤菌　1g

2',5'-寡腺苷酸合成酶1(OAS1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　黑曲霉　25g

白介素22受體α2(IL2Rα2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　包圍漆斑菌　5g

腫廇蛋白P63(TP63)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　97%　綠色木霉　1g
鼻氣管炎鳥桿菌探針法熒光PCR檢測(cè)試劑盒絲/蘇氨酸蛋白質(zhì)激酶II α抗體Rabbit human IgG/HRP  辣根過氧化物酶標(biāo)記兔抗IgG100 ul

2號(hào)染色體開放閱讀框66抗體Rabbit human IgM/HRP  辣根過氧化物酶標(biāo)記兔抗IgM100µl

CULLIN抗體Rabbit human IgA/HRP  辣根過氧化物酶標(biāo)記兔抗IgA20µl

小牛胸腺DNA抗體Rabbit monkey IgG/HRP  辣根過氧化物酶標(biāo)記兔抗猴IgG500 ul

1號(hào)染色體開放閱讀框226抗體Rabbit monkey IgM/HRP  辣根過氧化物酶標(biāo)記兔抗猴IgM100 ul

組織蛋白酶L抗體Rabbit mouse IgG/HRP  辣根過氧化物酶標(biāo)記兔抗IgG100 ul

絲/蘇氨酸蛋白激酶II β抗體(casein kinase IIβ)Rabbit mouse IgM/HRP  辣根過氧化物酶標(biāo)記兔抗IgM100 ul

細(xì)胞角蛋白18抗體Rabbit pig IgG/HRP  辣根過氧化物酶標(biāo)記兔抗豬IgG100 ul

轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1結(jié)合蛋白抗體Rabbit pig IgM/HRP  辣根過氧化物酶標(biāo)記兔抗豬IgM100µl