樣品RNA的抽提：
①產(chǎn)品僅用于科研取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。 產(chǎn)品名稱 | 斑點叉尾鮰病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Channel Catfish Virus(CCV) | 貨號 | YSP96531 |
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。好設(shè)立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。 熒光定量PCR試劑盒技術(shù)：
本實用新型技術(shù)公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設(shè)有限位凸起，下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋，側(cè)蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起，兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿，固定桿上通過轉(zhuǎn)動件轉(zhuǎn)動連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個部分，并將兩個部分通過側(cè)蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。
二甲(Standard for GC,≥99.9%(GC)(二甲異構(gòu)體+乙基）)TIE1 (D2K2T) Rabbit mAb2-氟-氯甲 氣相色譜儀檢定用標(biāo)準物質(zhì)（-甲溶液）(5.00mg/ml,基體:甲)Phospho-Synapsin (Ser9) Antibody氟-2- 液相色譜儀檢定用標(biāo)準物質(zhì)(萘-甲溶液)(0.0001g/mL,基體:甲)Synapsin Antibody2-氟-5-甲 氨基吡啶(標(biāo)準品)Phospho-SirT1 (Ser47) Antibody2,5-二氟甲 順式-4,7,10,13,16,19-二十二碳六酸甲酯(標(biāo)準品)Phospho-SirT1 (Ser47) Antibody2-氟-5-氯甲 2,6-二乙基(DEA)(標(biāo)準品)c-Jun (L70B11) Mouse mAb2-溴-5-氟甲 順式-5,8,11,14,17-二十碳五酸(標(biāo)準品)CDK9 (C12F7) Rabbit mAb溴-氟甲 間硝基氯標(biāo)準溶液(分析標(biāo)準品,用于環(huán)境分析,>99.6%(GC))CDK9 (C12F7) Rabbit mAb氟-甲氧基 環(huán)己烷(農(nóng)殘級)OGT (D1D8Q) Rabbit mAb (HRP Conjuga)2-氟肉桂酸 氯靈(標(biāo)準品)S6 Ribosomal Proin (54D2) Mouse mAb1H-吲唑-甲酸乙酯 Celi 硅藻土 545(助濾劑,碳酸鈉處理,通量煅燒)C/EBPδ Antibody5-氟-2-甲 Celi硅藻土，酸洗(用于總膳食纖維含量分析,TDF-100A)C/EBPδ Antibody2-三氟 Celi® 硅藻土545(助濾劑,通量煅燒（filr aid,flux calcined）)NCK1 (15B9) Rabbit mAb2,8-二氯喹啉 氯己定(標(biāo)準品)AP-2γ Antibody硫唑嘌呤 香茅(分析標(biāo)準品,≥99.0%(GC))SQSTM1/p62 (D6M5X) Rabbit mAb (Rodent Specific)2-氯-5-乙酮 多菌靈標(biāo)準溶液(100μg/ml,u=3%)VISTA (D5L5T) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjuga)2-氯-5-甲基-硝基吡啶 多菌靈標(biāo)準溶液(10μg/ml,u=3%)Phospho-MAPK/CDK Substras (PXS*P or S*PXR/K) (34B2) Rabbit mAb順-環(huán)己-1,2-二羧酸 氯氧乙酸(標(biāo)準品)Rap1B (36E1) Rabbit mAb溴-1H-咪唑
斑點叉尾鮰病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒S100鈣結(jié)合蛋白A11(S100A11)ELISA試劑盒Phospho-MARCKS (Ser152/156) 酸化丙氨酸蛋白激酶C底物Marcks抗體500µl RNA結(jié)合蛋白FUS(FUS/TLS)ELISA試劑盒Phospho-MARCKS (Ser162) 酸化丙氨酸蛋白激酶C底物Marcks抗體100 ul Rho家族GTP酶1(RND1)ELISA試劑盒MAD1 Mad1抗體20 ul Rho關(guān)聯(lián)含卷曲螺旋蛋白激酶2(Rock-2)ELISA試劑盒MAdCAM-1 粘膜血管定居因子抗體1 Kit Rho GDP解離抑制因子1(ARHGDIA/GDIA1)ELISA試劑盒DAXX Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白抗體500 ul REST協(xié)阻抑因子3(RCOR3)ELISA試劑盒Phospho-FADD (Ser191) 酸化Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白抗體100 ul ras同源物基因家族成員b(RHOB)ELISA試劑盒Mafa v-maf 肌腱膜纖維肉瘤癌基因同源物A抗體100 ul Q熱科克斯體2(Q fever)抗體(IgM)ELISA試劑盒MAFbx/Fbx32 泛素蛋白連接酶抗體100 ul Q熱科克斯體2(Q fever)抗體(IgG)ELISA試劑盒MAG-a/b 髓鞘相關(guān)糖蛋白a/b抗體100 ul |
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