PCR技術(shù)的定量原理：
擴(kuò)增曲線(xiàn)
在Real- qPCR中，對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過(guò)程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào)，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線(xiàn)，即為擴(kuò)增曲線(xiàn)。熒光擴(kuò)增曲線(xiàn)一般分為基線(xiàn)期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化，此時(shí)即為基線(xiàn)期。
PCR反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無(wú)線(xiàn)性關(guān)系，所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
熒光染料的優(yōu)點(diǎn)：
產(chǎn)品僅用于科研使用簡(jiǎn)便；
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合；
價(jià)格便宜；
熒光染料的缺點(diǎn)：
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會(huì)影響檢測(cè)的敏感性
非特異性產(chǎn)物會(huì)影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問(wèn)題可以通過(guò)熔解曲線(xiàn) (Melting curve) 進(jìn)行識(shí)別，進(jìn)而通過(guò)PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決?？偟膩?lái)說(shuō)，SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。

?
熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為T(mén)aqMan探針，其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán)，3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。
正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí)，引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上，探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。
當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí)，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來(lái)，從而使其發(fā)出熒光。檢測(cè)到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比，因此，根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問(wèn)題，反應(yīng)結(jié)束后無(wú)需通過(guò)熔解曲線(xiàn)檢測(cè)，縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。
TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩(wěn)定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn)：
成本高；
設(shè)計(jì)難度大；
只能用于檢測(cè)產(chǎn)物長(zhǎng)度低于150bp的反應(yīng)。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類(lèi)基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
?
熒光定量PCR原理：
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱(chēng)TaqMan PCR，后來(lái)也叫Real-Time PCR，是美國(guó)PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來(lái)的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來(lái)實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì)，熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過(guò)一個(gè)循環(huán)，收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào)，這樣我們就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線(xiàn)圖。
一般而言，熒光擴(kuò)增曲線(xiàn)可以分成三個(gè)階段：熒光背景信號(hào)階段，熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒(méi)有線(xiàn)性關(guān)系，根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段， PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線(xiàn)性關(guān)系，我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便，在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
N-甲基帕羅西汀（標(biāo)準(zhǔn)品）(S)-N-叔丁氧羰基-2-甲基哌

七氟烷（標(biāo)準(zhǔn)品）(S)-1-叔丁氧羰基-氨基吡咯烷

六氟異（標(biāo)準(zhǔn)品）2-溴-5-氟酚

羥基間二甲酸（標(biāo)準(zhǔn)品）順式-1,二-2-

戊酸鎂（標(biāo)準(zhǔn)品）D-

二甲氧芐啶（標(biāo)準(zhǔn)品）(四氫-2H-吡喃-基)甲

間甲酚（標(biāo)準(zhǔn)品）氟-2-

對(duì)甲酚（標(biāo)準(zhǔn)品）1,二

美雄諾龍（標(biāo)準(zhǔn)品）L-脯氨酸

對(duì)氨基水楊酸鈉（標(biāo)準(zhǔn)品）硫代水楊酸

間氨基酚（標(biāo)準(zhǔn)品）5--2-氟吡啶

亞甲藍(lán)（標(biāo)準(zhǔn)品）8-羥基喹啉

甲酸酯（標(biāo)準(zhǔn)品）2-溴-5-三氟

華法林鈉（標(biāo)準(zhǔn)品）芐氧基

華法林鈉2-哌啶

來(lái)氟米特雜質(zhì)I（三氟）（標(biāo)準(zhǔn)品）鄰香草

呋喃妥因（標(biāo)準(zhǔn)品）溴-甲酸甲酯

N-（甲?；?酪（標(biāo)準(zhǔn)品）1,二溴-5-
乙型肝炎病毒D型探針?lè)晒釶CR檢測(cè)試劑盒核糖核酸酶L抑制蛋白抗體Phospho-Ezrin (Thr567) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗、大、埃茲蛋白抗體IgG100 ug

Rho GTP酶激活蛋白24抗體Fabp2 /FITC  熒光素標(biāo)記脂肪酸結(jié)合蛋白2抗體IgG100 ul

GTP酶激活蛋白ASAP3抗體FABP(brain)/FITC  熒光素標(biāo)記腦型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體IgG100 ul

激活素受體1C抗體factor V/FITC  熒光素標(biāo)記凝血因子5抗體IgG100 ul

整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶13型抗體factor VIII/FITC  熒光素標(biāo)記第八因子相關(guān)抗原抗體IgG20 ul

去整合素樣金屬蛋白酶11抗體factor VIII/FITC  熒光素標(biāo)記第八因子相關(guān)抗原抗體IgG100 ul

去整合素樣金屬蛋白酶12抗體factor X III /FITC  熒光素標(biāo)記凝血因子ⅩⅢ抗體IgG500 ul

去整合素樣金屬蛋白酶15抗體FADD/FITC  熒光素標(biāo)記Fas死亡結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白抗體IgG100 ul

去整合素樣金屬蛋白酶2抗體FADD/FITC  熒光素標(biāo)記Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白抗體IgG1 Kit