熒光定量PCR試劑盒技術(shù)：
產(chǎn)品僅用于科研本實(shí)用新型技術(shù)公開了一種實(shí)時熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設(shè)有限位凸起，下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋，側(cè)蓋遠(yuǎn)離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起，兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿，固定桿上通過轉(zhuǎn)動件轉(zhuǎn)動連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實(shí)用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個部分，并將兩個部分通過側(cè)蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗報告給您。 產(chǎn)品名稱 | 小孢子菌屬通用探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Microsporum spp. | 貨號 | YSP96920 |
樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。
實(shí)驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個的PCR實(shí)驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
ATAD2 英文名稱： 三酸腺苷酶家族蛋白2抗體 0.2ml Anti-EpCAM/CD326/FITC 熒光素標(biāo)記上皮細(xì)胞特異性EpCAM/CD326蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml VK1 ELISA Kit 大鼠維生素K1Multi-class antibodies規(guī)格： 48T Anti-ADRA2/FITC 熒光素標(biāo)記alpha-2腎上腺素能受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml Rhesus antibody Rh FECH/Ferrochelatase 鐵螯合酶抗體 規(guī)格 0.2ml HL ELISA Kit 大鼠肝脂酶 96T MYBPC1 英文名稱： 肌球蛋白結(jié)合蛋白C抗體 0.2ml BRCC3 英文名稱： 癌易感基因復(fù)合物亞基蛋白3抗體 0.2ml Anti-PTEN/MMAC1(NT) 一種抑制基因抗體(N端)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml LAM(Human Lipoarabinomannan) ELISA Kit 人脂阿拉伯甘露聚糖Multi-class antibodies規(guī)格： 48T Anti-PDGF Receptor alpha/PDGF-R-A 血小板源性生長因子受體-A抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml Rhesus antibody Rh HMGA1/HMG-I/HMG-Y 高遷移率族蛋白A1抗體 規(guī)格 0.2ml Apo A1(Human anti-apolipoprotein A1 antibody) ELISA Kit 人抗載脂蛋白抗體A1 96T PDHX 英文名稱： 酸脫氫酶復(fù)合物X蛋白抗體 0.2ml 卵脂吐溫80營養(yǎng)瓊脂250克Lecithin Tween 80 Nutrient Agar化妝品檢驗中細(xì)菌計數(shù) 酰胺瓊脂250克Acetamide Agar綠膿桿菌的選擇性分離培養(yǎng) SCDLP液體培養(yǎng)基250克SCDLP Broth Medium化妝品檢驗中樣品制備、增菌 假單胞菌屬選擇瓊脂250克Cetrimide Agar用于綠膿桿菌的分離培養(yǎng) 普通瓊脂斜面培養(yǎng)基(PH8.0-8.2)250克Common Nutrient Agar一般細(xì)菌的培養(yǎng)，分離培養(yǎng)霍亂弧菌，埋迪霉菌鑒定用 PDP瓊脂250克King Medium A綠膿菌色素測定
小孢子菌屬通用探針法熒光PCR檢測試劑盒富含半胱氨酸與表皮生長因子樣蛋白2抗體OPGL/RANKL/CD254 /FITC 熒光素標(biāo)記骨保護(hù)蛋白配體抗體IgG100 ul 細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白2/腫瘤和微管相關(guān)蛋白抗體RANK/TNFRSF11A/CD265/FITC 熒光素標(biāo)記核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB受體抗體IgG1 Kit 染色質(zhì)修飾蛋白4B(4C)抗體OPN/FITC 熒光素標(biāo)記骨橋蛋白抗體IgG100 ul 酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體OPN/FITC 熒光素標(biāo)記骨橋蛋白抗體IgG1 Kit 酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體ORX-A/FITC 熒光素標(biāo)記增食欲素-A/欲激素AIgG100 ul 酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體Osx /FITC 熒光素標(biāo)記成骨相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子抗體IgG100 ul 酪蛋白激酶1γ2抗體Os05g/0477200 proin /FITC 熒光素標(biāo)記抗水稻白葉枯病菌Os05g0477200蛋白抗體IgG100 ul 柯薩奇病毒蛋白受體B抗體OTR/FITC 熒光素標(biāo)記縮宮素受體抗體IgG20 ul 腫瘤抑制因子FBW7抗體OVA/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗雞卵白蛋白/卵清蛋白抗體IgG100 ul |
點(diǎn)擊放大