原裝ELISA試劑盒與酶免elisa的原理區(qū)別使用須知

原裝ELISA試劑盒與酶免elisa的原理：
   酶免elisa是應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠載脂蛋白M（APO-M）水平。用純化的大鼠載脂蛋白M（APO-M）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入載脂蛋白M（APO-M），再與HRP標(biāo)記的載脂蛋白M（APO-M）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。ELISA試劑盒顏色的深淺和樣品中的載脂蛋白M（APO-M）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠載脂蛋白M（APO-M）濃度。
原裝ELISA試劑盒的基本原理：
   1）抗原或抗體可通過(guò)共價(jià)鍵與酶連接形成酶結(jié)合物，而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性；
   2）抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫學(xué)活性；
   3）酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后，可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來(lái)判定是否有免疫反應(yīng)的存在，而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的，因此，可以按底物顯色的程度顯示試驗(yàn)結(jié)果。
原裝ELISA試劑盒與酶免elisa使用須知：
   酶免elisa使用須知：
   1）嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
   2）試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
   3）請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
   4）封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
   5）濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
   6）各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，ELISA試劑盒以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
   7）所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
   8）本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
   9）底物請(qǐng)避光保存。
原裝ELISA試劑盒使用須知：
   1）顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應(yīng)。
   2）免疫酶染色各種細(xì)胞內(nèi)成份的定位。
   3）定量檢測(cè)體液中抗原或抗體成份。
   4）研究抗酶抗體的合成。
他們可能存在的弊端：
    ELISA是目前應(yīng)用zui廣泛的免疫標(biāo)記檢測(cè)方法。但由于ELISA自身存在的缺陷和某些人為因素都可造成實(shí)驗(yàn)性誤（漏）診的發(fā)生，分析引起實(shí)驗(yàn)誤差因素：
    1）試劑的運(yùn)輸與貯存ELISA試劑盒熱穩(wěn)定性差，遇熱后靈敏度、特異性都將降低。在37℃下放置1d相當(dāng)于4℃～10℃保存1.6個(gè)月，而ELISA試劑盒的貨架壽命只有6個(gè)月，這樣就要求試劑盒的在4℃～10℃下運(yùn)輸貯存，各實(shí)驗(yàn)室老師在試劑盒貯存環(huán)節(jié)上都能達(dá)到要求，但目前尚無(wú)法保證試劑盒的冷鏈運(yùn)輸，在炎熱的夏季，試劑盒經(jīng)過(guò)幾天的高溫，ELISA試劑盒長(zhǎng)途運(yùn)輸，其貨架壽命也將消耗殆進(jìn)，如各實(shí)驗(yàn)室還按試劑說(shuō)明書(shū)的有效期使用至6個(gè)月，將無(wú)法保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
    2）試劑盒質(zhì)量試劑盒質(zhì)量是關(guān)系到ELISA檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確度的核心問(wèn)題，目前ELISA試劑盒的和品牌眾多，產(chǎn)品質(zhì)量也參差不齊。