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| 肝素含量測(cè)定法 |
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| 點(diǎn)擊次數(shù)：1438 更新時(shí)間：2011-08-23 |
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本法系依據(jù)硫酸魚(yú)精蛋白能中和抗凝劑肝素，從而影響血漿凝固時(shí)間的原理，測(cè)定供試品中肝素含量。
試劑（1）缺血小板人血漿 無(wú)菌采集人全血于3.8%枸櫞酸鈉抗凝劑（9∶1）中，混勻，以每分鐘1500轉(zhuǎn)在4℃離心30分鐘，用塑料注射器取上層2/3的血漿，以每分鐘3500轉(zhuǎn)在4℃離心30分鐘，取上層2/3血漿，分裝于塑料管中，每支3ml，保存-40℃?zhèn)溆谩?br />（2）三羥甲基氨基甲烷（ Tris）緩沖液（pH7.5） 取三羥甲基氨基甲烷 7.27g、氯化鈉5.27g，加水溶解并稀釋至1000ml（用鹽酸調(diào)節(jié)pH至7.5）。
（3）腦磷脂混懸液 凍干腦磷脂加水復(fù)溶，取適量，用生理氯化鈉溶液稀釋，稀釋后的腦磷脂混懸液應(yīng)使空白凝固時(shí)間在200～300秒。
（4）0.025 mol/L氯化鈣溶液 取氯化鈣（CaCl2•2H2O）147g溶于1000ml水中,制成1mol/L氯化鈣貯備液。臨用時(shí),用水將1mol/L氯化鈣貯備液稀釋40倍。
（5）硫酸魚(yú)精蛋白溶液 取硫酸魚(yú)精蛋白適量，用pH7.5 Tris緩沖液溶解并稀釋成每1ml含1～20 mg的溶液。
供試品溶液的制備 于每支含不同濃度的硫酸魚(yú)精蛋白溶液10μl的塑料管中,分別加入按標(biāo)示量復(fù)溶后的供試品0.5ml，混勻。
測(cè)定法 在已含有缺血小板人血漿0.1ml的塑料管中，加入腦磷脂混懸液0.1ml，混勻，37℃放置1分鐘,加供試品溶液0.1ml、已預(yù)熱至37℃的0.025 mol/L氯化鈣溶液0.1ml,記錄凝固時(shí)間。用Tris緩沖液（pH7.5）0.1ml替代供試品溶液，同法操作作空白對(duì)照?？瞻讓?duì)照凝固時(shí)間不低于200秒試驗(yàn)成立。取凝固時(shí)間zui短的供試品管，作為硫酸魚(yú)精蛋白中和0.5ml供試品中的肝素量。硫酸魚(yú)精蛋白10μg中和1IU肝素。例如凝固時(shí)間zui短的供試品管中含硫酸魚(yú)精蛋白30μg，則中和供試品0.5ml中的肝素量則為3IU,即供試品每1ml含6IU肝素。
【附注】（1）直接與血和血漿接觸的器具應(yīng)為塑料制品或硅化的玻璃制品。
（2）采用全自動(dòng)凝血儀操作時(shí)，參考儀器使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。
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