| 羊源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒通用原則 |
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| 點擊次數(shù)：633 更新時間：2022-03-17 |
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羊源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒通用原則:
1, 先選擇好探針,然后設計引物使其盡可能的靠近于探針。
2, 擴增子的長度應不超過400bp,理想的*能在100-150bp內(nèi),擴增片斷約短,有效的擴增反應就越容易獲得。較短的擴增片斷也容易保證分析的一致性
3, 保持GC含量在20%和80%之間,GC富含區(qū)容易產(chǎn)生非特異反應,從而會導致擴增效率的降低,及在SG分析中非特異信號。
4, 為了保證效率和重復性,應避免重復的核苷酸序列,尤其是G(不能有4個連續(xù)的G)
5, 將引物和探針互相進行配對檢測,以避免二聚體和發(fā)卡結(jié)構(gòu)的形成。
b),探針設計指導
1,在設計引物之前設計探針
2,探針的Tm值應在68-70℃之間,如果是目測探針,則要仔細審查GC富含區(qū)。
3,探針的5’端要避免有鳥an酸,5’G會有淬滅作用,即使被切割下來這種淬滅作用也還會存在
4,選擇C多于G的鏈作探針,G的含量多于C會降低反應效率,這時就應選擇配對的另一條鏈作為探針。
6, 探針應盡可能的短,不要超過30個bp。
7, 檢測探針的DNA折疊和二級結(jié)構(gòu)。 小鼠神經(jīng)干細胞（EGFP標記） 人腦微血管內(nèi)皮細胞 人腦血管平滑肌細胞 人海馬神經(jīng)元 人少突膠質(zhì)細胞 人星形膠質(zhì)細胞 小鼠成纖維細胞（EGFP標記） mCF, 小鼠心臟成纖維細胞 MN-c, 小鼠皮質(zhì)神經(jīng)元 MN-h, 小鼠海馬神經(jīng)元 MSC, 小鼠雪旺細胞 MA, 小鼠星形膠質(zhì)細胞 MLF, 小鼠淋巴成纖維細胞 mRTEC, 小鼠腎小管上皮細胞 CSC, 小鼠心肌細胞 mEPC, 小鼠內(nèi)皮祖細胞-骨髓 MEF, 小鼠胚胎成纖維細胞 NSC，大鼠神經(jīng)干細胞 RN-h, 大鼠海馬趾神經(jīng)元 rEPC，大鼠內(nèi)皮祖細胞-骨髓 RN-c, 大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元 RN-s, 大鼠紋狀體神經(jīng)元 RSC, 大鼠雪旺細胞 RA, 大鼠星形膠質(zhì)細胞 RLF, 大鼠淋巴成纖維細胞 rRTEC, 大鼠腎小管上皮細胞 rCSC, 大鼠心肌細胞 RDFs, 大鼠真皮成纖維細胞 RLFs, 大鼠肺成纖維細胞 rCF, 大鼠心臟成纖維細胞 MN-h, 小鼠海馬神經(jīng)元 MN-s, 小鼠紋狀體神經(jīng)元 mOPC, 小鼠少突膠質(zhì)前體細胞 MA, 小鼠星形膠質(zhì)細胞 MLF, 小鼠淋巴成纖維細胞 mRTEC, 小鼠腎小管上皮細胞 CSC, 小鼠心肌細胞 小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞（BMSCs） MEF, 小鼠胚胎成纖維細胞
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