elisa酶聯(lián)免疫試劑盒的影響因素有哪些？ 1、固相載體
可溶性抗原或抗體吸附于固相載體而成為不溶形式，這是進行酶標(biāo)記測定的基本條件。許多物質(zhì)可作為固相載體，但在elisa酶聯(lián)免疫試劑盒中常用的是聚苯乙烯或聚氯乙烯微量反應(yīng)板及塑料管。
每批制品在使用前，須經(jīng)過實驗室鑒定，鑒定的方法和標(biāo)準(zhǔn)是對每批購置的微量反應(yīng)板或塑料管抽樣，用0.2ug/ml純化的正常人IgG進行包被，經(jīng)洗滌后加酶標(biāo)記抗人球蛋白進行反應(yīng)，再經(jīng)孵育洗滌，加底物顯色終止反應(yīng)后，逐孔在酶標(biāo)比色計中測定其消光值、光密度（OD值）。
一般認(rèn)為全板中每兩孔間OD值的誤差不超過10%為合格。如果中間孔與四周孔OD值相差太大，或者反應(yīng)板的這一邊與另一邊凹孔的OD值相差大，均不合格。此外，還要檢查陽性和陰性參考血清OD值是否有明顯差別。一般要求有10倍左右的差異為合格。
2、抗原
在ELISA中，包被于固相載體表面的抗原或抗體的來源和制備方法對試驗結(jié)果都有影響。包被所用的抗原必須是可溶性的，且要求是和穩(wěn)定的制劑，純度和免疫原性要高。而且抗原包被固相載體除濃度外，對時間、溫度、PH均有關(guān)系。
溫度高（如37℃、45℃、或56℃），包被時間可縮短，溫度低可延長包被時間。但為了方便起見，通常采用4℃包被過夜，可使抗原吸附得更加*且均勻。
在用聚苯乙烯或聚乙烯微量反應(yīng)板或塑料管作固相載體時，在堿性條件下（如0.1mol/L、PH9.6碳酸鹽緩沖液稀釋抗原）4℃包被過夜較為合適。
但在某些試驗中，如用LPS或毒素蛋白包被時，用PH7.2～7.4PBS稀釋才是滿意的。包被特異蛋白質(zhì)的濃度為1～10ug/ml，而對某些病原微生物抗原以5～20ug/ml較為合適，但均應(yīng)通過滴定。
