牛白血病抗體ELISA試劑盒檢查
試劑盒的制備及評(píng)價(jià)利用純化的gp51重組蛋白作為包被抗原研制了gp51-ELISA試劑盒，試劑盒主要成分包括：已包被抗原的96孔板、HRP標(biāo)記的兔抗牛IgG和牛白血病陰性、陽(yáng)性尺度血清。gp51重組蛋白的大量制備與純化將本實(shí)驗(yàn)室已構(gòu)建成功的含PET-32a-gp51表達(dá)載體的菌株復(fù)蘇，在大腸桿菌BL21中大量誘導(dǎo)表達(dá)，收集菌體經(jīng)超聲波破碎，將包涵體通過(guò)Ni~(2+)親和層析柱進(jìn)行純化，透析復(fù)性后用PAGE電泳檢測(cè)，得到純度較高的gp51重組蛋白。紫外光分光光度計(jì)檢測(cè)，重組蛋白濃度為0.216mg/mL。對(duì)試劑盒進(jìn)行了特異性、敏捷度、重復(fù)性及保留期試驗(yàn)，結(jié)果表明：試劑盒能特異地檢測(cè)牛白血病陽(yáng)性尺度血清，與牛傳染性鼻氣管炎、藍(lán)舌病、牛病毒性腹瀉和赤羽病等陽(yáng)性尺度血清均無(wú)交叉反應(yīng)；用該試劑盒對(duì)牛白血病陽(yáng)性尺度血清進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)定效價(jià)為1:256～1:512，敏捷度是AGIDT的4～8倍；重復(fù)性試驗(yàn)，試劑盒批內(nèi)差異為1.35%～4.11%，批間差異為3.49%～9.54%,分別小于10%和15%；保留期試驗(yàn)，試劑盒-20℃保留期為6個(gè)月，4℃保留期為1個(gè)月。
本研究在原有的研究基礎(chǔ)之上展開(kāi)，將已構(gòu)建并經(jīng)鑒定準(zhǔn)確的PET-32a-gp51表達(dá)菌株復(fù)蘇，在大腸桿菌BL21中大量誘導(dǎo)表達(dá),通過(guò)純化及復(fù)性后得到純度高、免疫學(xué)活性好的gp51重組蛋白，參照已建立的間接gp51-ELISA方法，以此重組蛋白研制了檢測(cè)牛白血病病毒抗體的間接gp51-ELISA試劑盒，并進(jìn)行了試劑盒的評(píng)價(jià)及初步應(yīng)用研究。地方流行性牛白血病(Enzootic Bovine leukosis,EBL)是由牛白血病病毒(Bovine leukemia virus,BLV)引起的以淋巴細(xì)胞持續(xù)性增生為特征的傳染性腫瘤性疾病,主要發(fā)生于4～8歲的成年牛。因此自主高水平的檢測(cè)試劑盒對(duì)該病的防制具有重要意義。目前我國(guó)使用的牛白血病檢測(cè)試劑幾乎全部來(lái)自國(guó)外，價(jià)格昂貴，檢測(cè)本錢很高。該病幾乎遍布*各養(yǎng)牛國(guó)家，在我國(guó)某些牛群中血清陽(yáng)性率達(dá)30%～50%，已成為牛的重要傳染病之一。
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