石蠟切片免疫熒光染色呈陰性結(jié)果或非特異性結(jié)果
有人會(huì)問酶免疫組化做的好好的，為何要做免疫熒光？其實(shí)，這也是我以前思考的難題，現(xiàn)在我認(rèn)為可能胞膜蛋白含量不高，用普通免疫免疫組化可能做不出來，需要敏感的免疫熒光方法來進(jìn)行蛋白檢測(cè)（我是看許多外文文獻(xiàn)都是這樣做的，因此選擇免疫熒光染色。）
問題及其解答：如何降低非特異性熒光染色和避免陰性著色？
1、非特異性染色產(chǎn)生原因及其解決方案：
⑴游離熒光素殘留在二抗中。一部分熒光素未與蛋白質(zhì)結(jié)合，形成了聚合物和衍化物，而不能被透析除去。二抗配置時(shí)用透析法或?qū)游龇ǚ蛛x熒光素標(biāo)記的二抗和游離的二抗。購(gòu)買高質(zhì)量、高純度的熒光素二抗。
⑵抗體以外的血清蛋白與熒光素結(jié)合形成熒光素脲蛋白，可與組織成分結(jié)合。
⑶組織抗原封閉不全。除去檢查的抗原以外，組織中還可能存在類屬抗原（如Forssman氏抗原），可與組織中特異性抗原以外之之相應(yīng)抗體結(jié)合。延長(zhǎng)血清封閉時(shí)間。
⑷從組織中難于提純抗原性物質(zhì)，所以制備的免疫血清中往往混雜一些抗其他組織成分的抗體，以致容易混淆。
⑸抗體分子上標(biāo)記的熒光素分子太多，這種過量標(biāo)記的抗體分子帶過多的陰離子，可吸附于正常組織上而呈現(xiàn)非特異性染色。
⑹熒光素不純、標(biāo)本固定不當(dāng)?shù)取?br>
⑺一抗和二抗孵育條件和濃度不合適。調(diào)整一抗和二抗孵育條件和濃度至*。
⑻一抗和二抗孵育后的清洗不充分。增加清洗次數(shù)和延長(zhǎng)清洗時(shí)間。
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